目录号:R516-50
试剂盒组成 |
保存 |
50次(R516-50) |
裂解液PRL |
室温 |
20 ml |
去蛋白液RW1 |
室温 |
40 ml |
漂洗液RW |
室温 |
10 ml |
RNase-free H2O |
室温 |
10 ml |
糖酚去除剂PAD |
室温 |
5 ml |
微量gDNA过滤器和收集管 |
室温 |
50套 |
微量RNA吸附柱和收集管 |
室温 |
50套 |
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:
本品为超微量总RNA提取的专用试剂盒。适用于从超微量的细胞、组织、昆虫、植物、细菌等样品中提取总 RNA。处理范围一般为细胞(1-106)或者组织(< 5mg)。配有gDNA过滤器,得到的RNA无DNA残留,可直接用于下游荧光定量PCR或者高通量测序等试验。
提示:
整个操作步骤是由3个步骤组成(所有步骤室温操作):
(一)样品裂解匀浆(二)样品清理(三)样品纯化
(一)样品裂解匀浆
a. 组织:5mg以内的组织加300μl的裂解液PRL后匀浆。
注:糖酚去除剂PAD是提取多糖多酚次级代谢产物色素含量丰富的困难样品不可缺少的成分。
b. 贴壁细胞:去除液体培养基后,直接往培养板中加入裂解液PRL溶解细胞,并用移液枪反复吹打充分裂解混匀。依据细胞的数量来决定所需的裂解液PRL(105 细胞以内加100μl,106 细胞以内加300μl)。
c. 悬浮细胞:离心沉淀细胞(≤500 x g),完全去除上清后用裂解液PRL重悬细胞沉淀。可短暂涡旋振荡。
d. 其它组织:其他难裂解的组织,细菌,酵母,植物匀浆需配合高速珠磨均质仪器和适合裂解珠(玻璃珠,钢珠,锆珠等)。
(二)样品清理
此步骤为可选步骤,主要是针对动植物组织和细胞,对于样品量很低(细胞数≤105))或者匀浆后能充分裂解均一的样品无需此步骤。
若研磨匀浆后不溶物碎片太多,可将匀浆后裂解物12,000rpm离心1分钟沉淀可能存在的裂解困难的碎片或者不溶物。将上清液转移到新的1.5ml离心管内。
(三)样品纯化
减少洗脱液体积可以提高RNA浓度,但是最低洗脱液体积不应少于6 μl。